Atividade antiparasitária contra plasmodium falciparum de fosfolipases A2 básicas purificadas do veneno de Bothrops diporus

Abstract

A malária é uma doença infecto-parasitária de grande importância médica a nível global, causada por protozoários do gênero Plasmodium spp. Considerando o aumento do número de cepas de parasitos resistentes aos fármacos utilizados na quimioterapia convencional, faz-se necessário a busca por novas moléculas com potencial antiparasitário a partir de produtos naturais. Dentre estes, destacam-se os venenos de serpentes por sua promissora atividade biológica contra uma diversidade de microrganismos patogênicos, como bactérias, fungos e protozoários. O presente trabalho tem como objetivo purificar fosfolipases A2 (PLA2) básicas do veneno de Bothrops diporus e caracterizar sua atividade contra formas intraeritrocíticas de Plasmodium falciparum in vitro. O veneno de B. diporus foi fracionado por cromatografia de troca catiônica em coluna CM-Sepharose e as frações obtidas testadas in vitro contra formas intraeritrocíticas de P. falciparum em diferentes concentrações. As sete frações eluídas apresentaram efeito plasmodicida, sendo que as básicas foram as mais relevantes. As frações 5 e 7 obtiveram valores de IC50 (Concentração Inibitória de 50%) de 59,5 ng/mL e 244 ng/mL, respectivamente, e a fração 6 IC50 de 1,59 ng/mL, sendo este último valor menor que o da Artemisinina, fármaco utilizado como controle positivo, com IC50 de 9,35 ng/mL. As frações 5, 6 3 7 foram então submetidas a cromatografia de fase reversa em coluna C18, onde obteve-se três proteínas com massas moleculares compatíveis a PLA2s, sendo denominadas BdTX-I, BdTX-II e BdTX-III, respectivamente. Após atividade enzimática sobre substrato sintético específico, BdTX-I e BdTX-II foram caracterizadas como PLA2s Asp49, ou enzimaticamente ativas, enquanto BdTX-III como PLA2 Lys49, ou enzimaticamente inativa, por não apresentar atividade catalítica. Ao serem testadas novamente sobre os parasitos, as PLA2s BdTX-I, BdTX-II e BdTX-III apresentaram IC50 de 2440 ng/mL, 15,3 ng/mL e 590 ng/mL contra P. falciparum, respectivamente, além de CC50 (Concentração Citotóxica de 50%) ≥100 μg/mL sobre células HepG2, demonstrando que as proteínas isoladas são seletivas e não tóxicas, quando calculado o Índice de Seletividade, não sendo também hemolíticas. Por meio das atividades realizadas foi demonstrado que as moléculas presentes no veneno de Bothrops diporus, com ênfase nas fosfolipases básicas, possuem capacidade de inibir o P. falciparum, em conjunto ou individualmente, revelando importante potencial biotecnológico a ser explorado.